ABSTRAK: Gliklazida (Gz)
adalah obat hipoglikemik oral generasi-2 yang digunakan untuk terapi diabetes
mellitus tipe-2.Gliklazida dimetabolisme di liver pada bagian endoplasmic retikulum
halus, yang dapat dibuat dalam sediaan mikrosom hati manusia. Mikrosom ini kaya
dengan sitokrom P450 (CYP450). Metabolit utama Gz yang terbentuk dalam mikrosom
tersebut adalah 7β-OH-Gz, 6α-OHGz, 6β-OH-Gz, dan Me-OH-Gz Metode HPLC metabolit
Gz yang pernah ada dilakukan dengan cara ekstraksi menggunakan pelarut organik.
Pada penelitian ini tidak dilakukan ekstraksi, namun dengan pengen-dapan
langsung hasil inkubasi Gz dalam mikrosom hati manusia menggunakan asam perklorat.
Namun tipe kolom, fasa gerak, detektor yang digunakan tidak berbeda (dimodifikasi).Untuk
menetapkan kadar keempat metabolit utama tersebut diperlukan metode bioanalisis
cuplikan hasil metabolisme Gz dalam mikrosom hati manusia. Menentukan kadar
keempat metabolit Gz hasil metabolisme dalam mikrosom hati manusia dengan
metode HPLC. Gliklazida dengan kadar 400µM diinkubasi dalam mikrosom hati
manusia menggunakan reagen regenerating pada suhu 370C selama 90
menit. Reaksi inkubasi diakhiri dengan pendinginan tabung pada suhu 40C
dan penambahan 10 µl asam perklorat 70%, sebanyak 10 µl, kemudian ditambahkan
larutan baku kerja standar internal klopropamid 200 µM sebanyak 20 µl,
dipusingkan 14.000 rpm selama 10 menit, supernatan diambil. Sebanyak 200 µl
supernatan ditambah larutan NaOH 2 M sebanyak 5 µl, kocok dan dipusingkan
14.000 rpm selama 5 menit. Supernatan sebanyak 65 µl disuntikkan ke kolom HPLC
(Beckman), kolom Ultrasphere ODS 5 µM
4,6 mm x 25 cm, dektektor UV pada 235 nm. Larutan eluen HPLC adalah dapar
asetat 5mM (pH 4.3)-Asetonitril (70 : 30), dengan laju alir 1,5 ml/menit. Waktu
Retensi 7β-OH-Gz, 6α-OHGz, 6β-OH-Gz, Me-OH-Gz, klorpropamida (IS) dan
Gliklazida adalah 4,40; 4,58; 5,55; 7,3; 12,30 dan 36 menit (tanpa mikrosom)
dan yang dengan mikrosom hanya 3 metabolit Gz yang terukur kromatogramnya,
kecuali metabolit 6α-OHGz. Linieritas, rekoveri, keterulangan, presisi memenuhi
syarat untuk penentuan kadar metabolit Gz dalam mikrosom hati manusia. Metode
HPLC untuk bioanalisis metabolit utama 7β-OH-Gz, 6β-OH-Gz dan Me-OH-Gz
merupakan metode yang terpilih dan murah, mudah, cepat serta baik validitasnya.
Kata kunci: Gliklazid -
metabolit - mikrosom hati manusia - HPLC
Penulis: Suharjono
Kode Jurnal: jpfarmasidd090015
Artikel Terkait :
