SUBKLONING GEN α-L-ARABINOFURANOSIDASE (abfA) DALAM VEKTOR EKSPRESI pYES2

ABSTRAK: Gen  pengkode  -L-arabinofuranosidase  (abfA)  yang  telah  dikloning  dalam  E.  coli  DH5a/pTP510 rekombinan  disubkloning  ke  sistem  ragi  Saccharomyces  cerevisiae.  Subkloning  gen  abfA  ke  dalam  S.  cerevisiae bertujuan untuk ekspresi enzim -L-arabinofuranosidase (AbfA) termostabil dalam sel inang yang sering diistilahkan sebagai  Generally  Recognized  As  Safe  (GRAS),  sehingga  enzim  ini  dapat  diaplikasikan  lebih  luas  seperti  dalam industri makanan dan minuman. Gen abfA disubkloning dengan cara amplifikasi Polymerase Chain Reaction (PCR) dari  templet  plasmid  pTP510.  Sepasang  gen  primer  pFSacI-Af  (forward)  dan  pXhoI-Af  (reverse)  yang  merupakan hasil disain dari penelitian ini digunakan untuk amplifikasi. Kondisi PCR dilakukan  sebagai berikut: denaturasi awal pada  94oC  selama5  menit;  siklus  PCR  30  kali  yang  terdiri  dari  denaturasi  (94oC  selama  1  menit),  annealing  (55oC selama 30 detik), dan polimerisasi/ekstensi 72oC selama 2 menit; serta ekstensi akhir 72oC selama 7 menit.  Gen abfA hasil amplifikasi disisipkan di antara promotor GAL1 dan terminator CYT1 dalam vektor ekspresi ragi pYES2. Hasil ligasi  ini  ditransformasikan  ke  dalam  sel  inang  E.  coli  TOP10.  Analisis  restriksi  plasmid  rekombinan  dari  hasil konstruksi ini, yang dinamakan plasmid pY-Af, menunjukkan ukuran yang sesuai, sekitar 7,4 kb, yang sudah sesuai dengan penjumlahan ukuran plasmid induk (5,9 kb) dan fragmen DNA sisipan (1,5 kb).

Kata kunci:  -L-arabinofuranosidase;  Saccharomyces  cerevisiae;  subkloning,  vektor  ekspresi;    Polymerase  Chain Reaction

Penulis: I Nengah Wirajana, Eddy Bagus Wasito

Kode Jurnal: jpkimiadd100230

Artikel Terkait :

Jp Kimia dd 2010

• UJI PELINDIAN SENYAWA-SENYAWA TEMBAGA DAN TIMAH HITAM SETELAH STABILISASI/SOLIDIFIKASI DENGAN SEMEN PORTLAND MENGGUNAKAN ROTARY AGITATOR
• SIFAT DAYA SERAP AIR DAN STABILITAS PENYERAPAN AIR HIDROGEL POLIMER KOMPOSIT
• PENERAPAN MEMBRAN MIKROFILTRASI PADA PEMURNIAN EKSTRAK KALDU KACANG HIJAU (Phaseolus radiatus L.) SEBAGAI FORTIFIKAN PRODUK MAKANAN
• AKTIVITAS ANTIDIABETES EKTRAK ETIL ASETAT DAUN PANDAN WANGI (Pandanus amaryllifolius Roxb.)
• UJI AKTIVITAS EKSTRAK DAN FRAKSINASI DAUN BRUCEA JAVANICA (Merril) SECARA INVITRO
• ISOLATION AND IDENTIFICATION OF 9-METHOXYCANTHIN-6-0NE COMPOUND FROM Eurycoma longifolia ROOTS
• PREPARATION OF MgO-CeO2 MIXED OXIDE WITH IONIC LIQUID AS CATALYST FOR DIMETHYL CARBONATE SYNTHESIS VIA TRANSESTERIFICATION
• MUNICIPAL ORGANIC WASTE AS SUBSTRATE OF BIOENERGY AND FERTILIZER PRODUCTION
• PEMANFAATAN KITIN I KITOSAN SEBAGAI BAHAN ANTI MIKROBA
• TEKNIK APLIKASI KONSORSIUM BAKTERI ENDOFITIK PENAMBAT N2 ASAL TUMBUHAN EKOSISTEM AIR HITAM KALIMANTAN TENGAH DALAM MENINGKATKAN PERTUMBUHAN DAN PENAMBATAN N2 TANAMAN PADI GOGO
• ISOLASI ENZIM HORSERADISH PEROKSIDASE (HRP) DARI KULTUR SEL DAUN ARMORACIA LAPATIFOLIA DENGAN CARA FRAKSINASI MENGGUNAKAN AMONIUM SULFAT
• ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA TRITERPENOID DAN ASAM 3-HIDROKSINIKOTINAT DARI EKSTRAK DIKLOROMETANA AKAR Garcinia picrorrhiza Miq
• STUDI POTENSI EKSTRAK BRUCEA JAVANICA SEBAGAI BIOAKTIF ANTIKANKER PAYUDARA TERHADAP SEL T47D
• KARAKT£RISASI SENYAWA AKTIF ANTI BAKTERI MINYAK ATSIRI BUNGA CENGKEH (Syzygium arimaticum)
• KARAKTERISASI FRAKSI AKTIF ANTIBAKTERI EKSTRAK DARI DAUN PEPE (Gymnema reticulatum Br)
• LAJU KOROSI DAN MEKANISME INHIBISI ALUMINIUM MURNI MENGGUNAKAN KALIUM DAN KALSIUM STEARAT
• EKSTRAKSI ZAT WARNA ALAMI CAMPURAN BIJI PINANG, DAUN SIRIH, GAMBIR DAN PENGARUH PENAMBAHAN KMnO4 TERHADAP PEWARNAAN KAYU JENIS ALBASIA
• ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAN TRITERPENOID DARI EKSTRAK n-EKSANA DAUN KEPUH (Sterculia foetida L.) SERTA UJI AKTIVITAS ANTIRADIKAL BEBAS
• EFEKTIVITAS SISTEM PENGOLAHAN INSTALASI PENGOLAHAN AIR LIMBAH SUWUNG DENPASAR TERHADAP KADAR BOD, COD, DAN AMONIA
• BIOSORPSI KROMIUM(VI) PADA SERAT SABUT KELAPA HIJAU (Cocos nucifera)
• AKTIVITAS ANTIJAMUR MINYAK ATSIRI RIMPANG DRINGO (Acorus calamus L.) TERHADAP JAMUR Botryodiplodia theobromae PENYEBAB BUSUK BUAH PISANG
• KANDUNGAN ALUMINIUM DALAM KALENG BEKAS DAN PEMANFAATANNYA DALAM PEMBUATAN TAWAS
• SCREENING FITOKIMIA DAN AKTIVITAS ANTIRADIKAL BEBAS EKSTRAK METANOL DAUN GAHARU (Gyrinops versteegii)
• FRAKSINASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA TANIN PADA DAUN BELIMBING WULUH (Averrhoa bilimbi L.)