Isolasi dan Karakterisasi Protease Serupa Tripsin (PST) dari Lactobacillus plantarum FNCC 0270
Abstrak: Tripsin adalah suatu
enzim yang penting baik untuk keperluan riset maupun industri farmasi, obat dan
kesehatan, terutama untuk dikembangkan sebagai bahan baku enzim pencernaan.
Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengkarakterisasi protease
serupa tripsin (PST) dari sumber yang belum banyak diteliti sebagai penghasil
tripsin, yaitu Lactobacillus plantarum FNCC 0270. Fermentasi untuk mengisolasi
PST dari L. plantarum FNCC 0270 telah dilakukan menggunakan fermentor LKB volume
kerja 3,5 liter, pada suhu 37 o C, pH 8,
agitasi 77 rpm dan aerasi 0,5 vvm. Komposisi media terdiri dari 3,64% baker
yeast, 1,21% glukosa, 0,13% susu skim. Dari proses fermentasi tersebut dihasilkan
aktivitas enzim sebesar 0,00129 U/mL, kadar protein 0,49 mg/mL. Pemurnian PST
ini dilakukan dengan ultrafiltrasi Hollow Fiber Catridge 5 kD, pengendapan
ammonium sulfat jenuh (30-70%), membran polyesthersulfone 30 kD dan kolom
kromatografi penukar ion Q-XL dan kolom kromatografi afinitas HiTrap
masing-masing memberikan peningkatan kemurnian terhadap PST kasar. Hasil
analisis protein dengan SDS-PAGE PST menunjukkan adanya pita pada berat molekul
setara dengan 47,35; 38,42; 21,40 dan 12,96 kD. PST hasil isolasi dapat stabil
pada pH dan rentang suhu 25-35 o C,
yaitu dengan waktu paruh yang tetap sama pada 693,2 menit. Nilai K m dan V maks
dari PST masing-masing adalah 0,231 mM dan 0,001 U/mL menggunakan subtrat
N-α-benzoyl-DL-arginin-p-nitroanilida. PST dihambat oleh EDTA, Ca 2+ , Zn 2+ ,
Mg 2+ , Mn 2+ dan oleh substrat–substrat spesifik. Hasil karakterisasi PST dari
L. plantarum FNCC 02700 dapat disimpulkan bahwa protease serupa tripsin (PST)
adalah tripsin.
Kata kunci: Lactobacillus
plantarum FNCC 0270, protease serupa tripsin (PST), pemurnian, karakterisasi
Penulis: TRISMILAH, WAHONO
SUMARYONO, AMARILA MALIK, MOHAMAD SADIKIN
Kode Jurnal: jpfarmasidd140327
